国产精品无码一区二区三区,日本丰满少妇无码AⅤ波多,一女多男3根一起进去描述,男女一边摸一边做爽爽

免費(fèi)咨詢熱線:
15522676233
技術(shù)文章
首頁 > 技術(shù)中心 > NGS測序之文庫構(gòu)建

NGS測序之文庫構(gòu)建

 更新時(shí)間:2024-04-08 點(diǎn)擊量:1653

由于二代測序讀長的限制,不可能一下將一個很長的基因序列測通,因此需要先將長基因序列隨機(jī)片段化成小片段,這樣的話,這些片段就可以覆蓋整個基因組。所以需要構(gòu)建文庫。

一、文庫構(gòu)建的步驟

文庫構(gòu)建大致步驟類似,但是各有各自du特的點(diǎn),例如,RNAseqmiRNA,lncRNA,mRNA方法各有差異,具體方法以后有機(jī)會再補(bǔ)充。這里以IlluminaPE文庫為例,其流程圖如下圖。

6-2.png


二、文庫構(gòu)建詳細(xì)步驟

1DNA片段化 (Fragment DNA

使用超聲、酶或者加熱的方式將DNA樣品打碎成小片段,一般在300 ~ 800bp之間除非有特殊要求。

2末端修復(fù)(End Repair

補(bǔ)平片段化時(shí)導(dǎo)致的不平末端。

33' 末端加“A" A-tailing

3‘ 末端加A,轉(zhuǎn)換為粘性末端,與adapter 互補(bǔ)配對,因?yàn)?/span>adapter 3‘端有一個突出的T。

4)接頭連接( ligation adaptor

這一步有兩種不同的添加策略如下圖。

6-3.png

左邊的圖是直接在fragment DNA的兩端直接加上full Y-adapter, adapter中已經(jīng)包括了和P5/P7 oligo互補(bǔ)的序列, index, 以及Read1/Read2的測序引物。

右邊的圖是先在fragment DNA的兩端加上PE adapter, 然后再引入和P5/P7 oligo互補(bǔ)配對的序列以及index序列,分兩步:

A. PE adapter添加利用堿基互補(bǔ)配對的原則,加上PE adapter。PE adpater中一部分是建庫PCR富集時(shí)候需要用的引物序列,另一部分是測序時(shí)需要用的引物。

B.PCR 添加 index,P5,P7

Index也稱barcode,用來區(qū)分不同樣本的文庫,因?yàn)闇y序儀一個lane產(chǎn)生數(shù)據(jù)量若干Gb,為了最da化利用測序儀,一次上機(jī)常會進(jìn)行多個樣本文庫混合測序,在后續(xù)分析時(shí),Index用來區(qū)分?jǐn)?shù)據(jù)是來自哪個樣本。

      PCR富集目的片段

進(jìn)行PCR擴(kuò)增,循環(huán)數(shù)與投入的DNA量有關(guān),使得文庫達(dá)到上機(jī)濃度。

擴(kuò)增文庫大小質(zhì)檢

使用Agilent 2100對文庫的insert size進(jìn)行檢測。

文庫濃度定量

Qubit3.0 進(jìn)行初步定量 Q-PCR對文庫的有效濃度進(jìn)行準(zhǔn)確定量,至此文庫構(gòu)建結(jié)束。

更多有關(guān)NGS測序之文庫構(gòu)建的相關(guān)內(nèi)容,請聯(lián)系BioDynami建庫試劑盒代理商——北京百奧創(chuàng)新科技有限公司

image.png














成人做受视频试看60秒| 粗了大了 整进去好爽视频| 久久人做人爽一区二区三区| YSL千人千色YESE88网站| 国产亚洲成AV人片在线观黄桃| 久久久精品| 日韩精品视频| 国产CHINESE男男GAY| FREE另类老女人HD| 国产成年无码久久久久毛片| 狂野欧美性猛交XXXX| 黄色视频app下载| 教官脔到她哭H粗话H好爽视频| 中文字幕日韩欧美一区二区三区| 久久久久亚洲AV无码专区网站| 亚洲最大的成人网站| 乖宝撞的你舒不舒服H| 色综合久久久无码中文字幕| 日本人真人姓交大视频| 他一边曰一边吃我奶小说免看| 麻豆人妻少妇精品无码专区| 性国产SE╳O色欲A片欢迎观看| 精产国品一二三产品区别在| 征服双收岳女两| 女人18毛片a级毛片免费视频| 免费无码国产欧美久久18| 国产精品日韩欧美一区二区三区| 无码中文字幕一区二区三区| 初爱视频教程| 好硬你摸摸下面涨的很疼| 狠狠精品干练久久久无码中文字幕| 久久久久久人妻一区二区三区| 国产乱码精品一区二区三区四川人| 无码高潮又爽又黄又刺激视频| 成年免费视频黄网站在线观看| 毛片亚洲AV无码精品国产午夜| 40岁的女人私密很紧致| 亚洲熟妇色XXXXX欧美老妇| 精品国产乱码久久久久久口爆| 与子敌伦刺激对白播放| 国产特级毛片AAAAAA高清|