exoRNeasy Midi and Maxi Kits

Cat. No. / ID: 77144

· 高純度的總RNA(包括小RNA部分)來自外泌體和其他細胞外囊泡(ev)

· 只從外泌體中分離RNA，不包括非囊泡蛋白復合物中的RNA

· 方便的柱上程序可以在一小時內獲取RNA

· Maxi試劑盒提供的高靈敏度，允許大樣本輸入量檢測低豐度RNA

· 從大多數生物液體中分離，包括尿液、血清、血漿、腦脊液和細胞培養(yǎng)上清

Product Details

exoRNeasy Midi and Maxi Kits使用親和性膜離心柱，有效地從大多數生物液體，包括尿液，血清，血漿，腦脊液和細胞培養(yǎng)上清中捕獲外泌體和其他ev。然后，試劑盒使用經過驗證的RNeasy MinElute自旋柱從ev中分離RNA。midi柱格式可以高效地處理較小的樣本體積(最多1ml血清/血漿或4ml尿液)，而maxi柱格式允許使用大樣本體積，最多4ml血清/血漿、16ml尿液或32ml細胞培養(yǎng)上清，以高置信度檢測低豐度rna。結果是快速，一致和高度適合敏感的下游應用。

Performance

exoRNeasy純化外泌體和其他細胞外囊泡的方案不僅比超離心更快，而且制備的制劑更干凈。掃描電子顯微鏡顯示，雖然這兩種技術都能提供預期大小的完整囊泡，但超離心制備也包含許多較小的結構，它們與預期大小或形狀不匹配。

此外，由Bioanalyzer分析，exoRNeasy和傳統(tǒng)的超離心方法提供了類似的大小和產量大小的RNA。

最后，exoRNeasy在血漿中捕獲所有無細胞mRNA，以及ev相關的miRNAs，這是通過RT-qPCR實驗對使用exoRNeasy純化的RNA和從exoEasy柱流出得到確認的。

Principle

exoRNeasy Midi and Maxi Kits改進了傳統(tǒng)的超離心微囊分離方法，在短短20分鐘內產生純化的細胞外囊泡。使用Exosome Diagnostics公司開發(fā)的技術，試劑盒使用自旋柱格式和專門的緩沖液從預過濾的生物液體中捕獲外泌體;使用Maxi試劑盒可達32毫升，使用MIDI試劑盒可達4毫升。然后使用QIAGEN miRNeasy技術提取總RNA。整個過程，從樣本到RNA，只需要一個小時。

exoRNeasy血清/血漿啟動試劑盒提供midi和maxi exoEasy柱，可在不同體積的預過濾生物液中進行分析。

Procedure

從細胞外微泡分離RNA的完整實驗包括兩步:純化exosomes和分離RNA。

在exosomes純化步驟，預過濾的而漿(不包含大干0.8uM的微粒)與Buffer XBP混合，加至exoEasav親和性膜離心柱上。

結合到柱上。使用BufferXWP洗滌結合在膜上的囊泡，之后使用QIAzol裂解。

在RNA分離步驟，在QIAzol洗脫液中加入氯仿，回收水相，將其與乙醇混合。包括miRNA在內的總RNA結合到離心柱上，洗滌三次后洗脫。 

Applications

exoRNeasy試劑盒非常適合從生物流體樣品中發(fā)現(xiàn)的微囊中分離總RNA，包括mRNA和miRNA。